使用荧光显微成像系统的钙成像
钙成像分析
近年来,使用荧光显微镜进行钙成像(Ca成像)拍摄的研究者正在不断增加。
钙成像是一种测量钙在细胞内的流动情况,对活动中的神经元��钙信ꦍ号进行直接观察的方法。被广泛运用在脑细胞研究等领域。
钙成像的原理
进行钙成像时,需要借助荧光显微镜或荧光平板分析仪进行观察。将一旦与钙离子结合,就会改变荧光强度的蛋白质或钙荧光指示剂导入细胞内部,根据荧光强度的变化,检测钙离子的浓度变化。
但是,由于钙荧光指示剂的荧光效果非常微弱𓆏,观察时必须辅以大功率的激光照射,可能会导致🎐细胞死亡。因此,在绝大多数人眼中,顺利完成钙成像并非易事。
钙成像的失败事例及对策
钙成相的出现未知错误例证,只是类式于荧光显微镜活组织系成相的出现未知错误例证,组织系减弱、大家都讨论大概、组织系逃脱游戏观景视野,以下都包括熟悉的出现未知错误例证。例如,如果对钙成像开始一段时间后的细胞状况进行观察,可能会发现细胞衰弱甚至死亡的现象。
其中的重要原因之一,就是高强度的激发光对细胞造成了损伤(光毒性)。
解决这一问题的对策如下所示。
- 请尽可能使用灵敏度高的相机
- 请并用增益或Binning
- 请采用能够感知微弱荧光的设定
- 请尽量调弱激发光
- 不进行拍摄时请切断激发光
在进行钙成像的过程中,有时还会发生焦点从中途就模糊的现象。这可能是因为温度漂移导致细胞移动,设定出错,抑或是细胞在分裂过程中上下移动,致使焦点偏移。许多实施荧光显微镜观察的研究者都经历过这样的情况。
作为对策,可以使用自动对焦功能或Z栈功能,预防焦点偏移的发生。
钙成像的观察事例
这样扶持一身化荧光显微影像整体BZ-X800
- 无需暗室、操作简单,可非常清晰地进行显微镜观察。
- 利用由制冷相机和专用镜头构成的高灵敏度光学系统,能够在尽量减少细胞损伤的同时,获取高精细的荧光图像。
- 能够一次性对多个标本进行延时拍摄,便于开展相同条件下的比较检验。
什么是G CaMP?
一种由蛋白质构成的钙传感器。
🍬运用基因工程技术,用绿色荧光蛋白、钙调素、肌球蛋白轻链片段拼接而成的钙传感器ꦜ蛋白质。可以植入基因,使之与动物模型的组织、细胞特异性启动子结合,起到仅对目标组织或细胞瘤实施钙成像处理的目的。